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细胞污染判断指南:看这几点,早发现早处理

30 人阅读发布时间:2025-12-29 09:10

细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一,严重影响实验结果的可靠性。污染不仅会导致细胞死亡或状态异常,还可能造成交叉污染,使长期研究前功尽弃。因此,及时识别和处理污染至关重要。

常见的生物性污染包括细菌、真菌、支原体、黑胶虫、原虫、病毒以及非同种细胞(交叉污染)等。不同类型的污染在表现上各有特点,需通过多种手段综合判断。

污染类型的识别特征

以下为常见污染类型的典型表现:

污染类型

肉眼/培养基变化

显微镜下特征

对细胞影响

细菌

培养基浑浊、变黄,pH升高

黑色细沙状颗粒,可见游动

生长受抑制,快速死亡

真菌/霉菌

清亮或轻微浑浊,可能有丝状物

丝状、珊瑚状结构,部分呈芽孢形态

缓慢消耗营养,最终导致细胞死亡

支原体

通常无明显变化

倒置显微镜下不可见(<0.8μm

生长缓慢,DNA/RNA表达改变,难察觉

黑胶虫

不浑浊

低倍镜下黑色点状,高倍可见“小虫”游动

初期影响小,严重时影响增殖

原虫

轻微浑浊

大量细小点状物轻微活动

争夺营养,繁殖减慢,边缘不清晰

病毒

无明显变化

无法通过常规显微镜识别

可能引起细胞病变,影响疫苗安全性

交叉污染

无特异性变化

细胞形态与预期不符,生长速度异常

实验无效,数据不可靠

补充说明:支原体污染最难发现,因其缺乏细胞壁且体积微小,在普通倒置显微镜下不可见。许多血清未做支原体阴性检测,增加了感染风险。

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检测方法推荐

1肉眼观察:定期检查培养基是否浑浊、颜色是否改变,并注意是否有异味(无需开盖)

2显微观察:使用倒置显微镜,先低倍后高倍观察细胞间是否存在异物及其运动情况。

3PCR检测:特异性高,可用于检测支原体、病毒等难以观察的污染物。

4专用试剂盒:如MycoAlert®等商业化产品,可快速检测支原体污染。

5细胞克隆化:最可靠的方法之一,若克隆后代形态一致,则基本排除污染。

建议

养成每日观察习惯:每次进出培养箱都快速扫视每瓶细胞的状态。

区分“污染”与“杂质”:背景中的“脏东西”可能是器皿外灰尘或显微镜污渍,应先清洁设备再确认。

定期筛查支原体:建议每周或每批新血清使用前进行支原体检测。

严格无菌操作:避免同时操作多株细胞,使用独立耗材,防止交叉污染

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