ELISA阳性对照选择有哪些技巧

37 人阅读发布时间：2025-12-05 10:03

在ELISA实验中，阳性对照用于验证检测系统的有效性、确认试剂活性以及排除假阴性结果。一个良好的阳性对照能产生稳定且可重复的信号，帮助判断实验是否成功运行。若阳性对照无反应，可能提示试剂失效、操作失误或检测条件未优化。
一、ELISA阳性对照选择标准
1、‌核心要求‌：
必须含已知浓度的目标物，用于验证实验体系有效性。
浓度应覆盖检测范围（如试剂盒标定的高、中、低值）。
2、‌类型选择‌：
双抗体夹心法：需配对抗体，确保高特异性。
竞争法：需与待测样本竞争结合，显色结果相反。
二、操作优化技巧
1、‌样本处理‌：
避免溶血、细菌污染，血清样本需56℃热灭活30分钟以消除类风湿因子干扰。
高浓度样本需稀释（如1:10），防止“钩状效应”导致假阴性。
2、‌质控设置‌：
每板需设阴性对照（健康人血清）和空白对照（仅稀释液）。
板内/板间变异系数（CV）应分别<5%和<15%‌
三、结果判读与验证
1、‌Cut-off值法‌：
以阴性对照均值+2.1倍SD为阈值，样本OD值≥此值判为阳性。
2、‌S/N比值法‌：
样本OD值/阴性对照OD值≥2.1为阳性，1.5-2.1为可疑。
3、‌重复验证‌：
临界样本需复测，结合临床数据综合判断。
建议
设置阳性对照是ELISA实验不可或缺的一环，必须确保其有效性、组成匹配性和信号可重现性。实验前应系统查阅文献和技术资料来选定合适对照，并在每次实验中同步设置阴性对照和空白孔，以全面评估实验质量。如果阳性对照未能产生预期信号，应首先排查试剂状态、孵育条件和仪器校准等问题。

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