ELISA操作真的很简单吗？

ELISA操作真的很简单吗？
酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种常见的免疫实验技术。科研工作者可以用它来检测样本中特定抗原或抗体。ELISA基本原理相对简单，但是整个实验涉及多个步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。以下是ELISA实验步骤：
一、实验前准备
‌试剂平衡‌：将试剂盒及待测样本置于室温平衡30分钟，确保试剂温度一致。
‌核对组分‌：打开试剂盒后，对照说明书核对所有组分是否齐全（如标准品、酶标板、洗涤液等）。
‌酶标板处理‌：根据实验需求拆取所需数量的酶标条，剩余部分立即放回密封袋保存。
二、标准品稀释与加样
1、‌标准品稀释‌：
取7个离心管，标记为S2-S7及空白管（Blank）。
每管加入200μL标准品稀释液，从S1标准品开始进行梯度稀释（如2倍稀释法）。
2、‌加样操作‌：
将稀释好的标准品、样本及空白对照分别加入对应孔中，每孔加样量需一致（通常50-100μL）。
加样时避免气泡，且需在15分钟内完成，防止孔板风干。
三、孵育与洗涤
‌首次孵育‌：加样后封板膜密封，37℃孵育50分钟。
‌洗板‌：孵育结束后，用洗涤液洗板3-5次（手动洗板需使用排枪），彻底拍干孔内液体。
四、酶标抗体与显色
‌加酶标抗体‌：按说明书稀释二抗或酶标结合物，加入孔中后37℃孵育50分钟。
‌显色反应‌：
加入显色液（如TMB底物），避光孵育15分钟，孔内液体变为蓝色。
立即加入终止液，颜色由蓝变黄，5分钟内用酶标仪检测。
五、数据读取与保存
‌读板‌：设置酶标仪参数（如450nm波长），读取各孔OD值。
‌数据导出‌：通过软件分析数据，生成标准曲线并计算样本浓度。
‌试剂保存‌：剩余试剂需2-8℃密封保存，避免反复冻融‌