褪黑素ELISA试剂盒的灵敏度该如何确定？

82 人阅读发布时间：2025-10-29 16:31

褪黑素ELISA试剂盒的灵敏度是指能够可靠地检测到的最低褪黑素浓度。确定其灵敏度的方法通常包括：
一、查阅说明书中的灵敏度参数：‌
试剂盒说明书通常会明确标注灵敏度（如“检测限”或“最低检测限”），例如“灵敏度为1.6 pg/mL”‌或“3.4 pg/mL”。
灵敏度需低于样本预期浓度至少1个数量级，确保检测可靠性。
二、标准曲线的建立：
通过使用一系列已知浓度的褪黑素标准品来绘制标准曲线。标准曲线的下限检测浓度是灵敏度的一个重要指标，通常定义为信号与背景（S/B）比值大于某个预定值（例如2或3）时对应的浓度。
三、批内/批间精密度测试‌
重复检测低浓度样本（如接近灵敏度值），计算变异系数（CV%）。批内CV<10%、批间CV<15%表明灵敏度稳定‌
回收率试验：在不同浓度水平的样本中加入已知量的褪黑素，然后测定其浓度，计算回收率。理想的回收率应在80%到120%之间，表明试剂盒能准确测量样本中的褪黑素含量。
四、特异性检测：
检查试剂盒对褪黑素的特异性，通过测定与褪黑素结构相似但不相关的物质（如5-HT、NAS等）的交叉反应率，以确保试剂盒对目标物质的选择性。
五、交叉反应验证‌
检测结构类似物（如5-甲氧基色醇），若OD值无显著升高，则说明试剂盒特异性强，灵敏度数据可靠。
确定褪黑素ELISA试剂盒灵敏度需结合验证实验（回收、精密度、特异性），优先参考试剂盒说明书中的具体数值和操作步骤。若样本中褪黑素浓度极低，建议选择LOD更低（如<0.2ng/ml）的高灵敏度试剂盒。‌

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