ELISA试剂盒的回收率会受哪些因素影响？

96 人阅读发布时间：2025-10-27 15:31

ELISA试剂盒回收率是指在样品分析过程中，检测方法能够准确识别和定量目标分析物的能力，通常以百分比表示。例如，若标准溶液为1 mg/L，检测结果为0.99 mg/L，则回收率为99%。ELISA试剂盒回收率的影响因素及优化策略如下：
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一、样品因素：
1、样本保存不当：样本保存时间过长可能导致蛋白质降解或变性，影响实验结果。新鲜采集的样本应优先使用，若需长期保存，应分装低温冻存，并避免反复冻融。
2、抗凝剂干扰：某些抗凝剂如肝素可能增加OD值，而EDTA和酶抑制剂可能抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。
3、样本脂肪含量：高脂肪含量的样本可能干扰抗原抗体反应，造成假阴性，需通过冷冻高速离心处理后取中间澄清段进行检测。
二、试剂因素：
1、抗体纯度和效价：选择高纯度、高亲和力和特异性强的抗体，可提高试剂盒的灵敏度和准确性。
2、标准品定值准确性：标准品定值直接影响定量ELISA测定的准确性，需选用纯度高、稳定性好的抗原物。
3、标记物活性：酶标记物的活性直接影响反应效果，活性差的标记物会降低回收率。
三、实验操作因素：
1、‌孵育条件‌：温度波动±2℃或时间偏差>10分钟显著影响结合效率，需使用恒温设备。
2、‌洗涤不充分‌：残留未结合物导致假阳性，建议洗板3-5次，拍干后立即加样。
3、‌标准品配制‌：冻干标准品复溶后需静置15分钟，避免气泡影响浓度准确性。
四、环境控制：
‌湿度影响‌：相对湿度>70%可能导致微孔板边缘效应，建议在干燥环境中操作。
‌底物稳定性‌：TMB底物见光易分解，开封后需4℃避光保存并在30分钟内使用。
了解这些因素并采取相应措施，可以有效提高ELISA试剂盒的回收率，确保实验结果的准确性和可靠性。‌

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