- 移动端
上海抚生实业有限公司品牌商
9 年
手机商铺
商家活跃：
产品热度：
- NaN
- 0
- 0
- 2
- 2
全部产品
- 查看全部分类
- 标准品
- 抗体
- ELISA试剂盒
- PCR相关试剂
- 小鼠elisa检测试剂盒
- 兔elisa检测试剂盒
- 豚鼠elisa检测试剂盒
- 人elisa检测试剂盒
- 羊elisa检测试剂盒
- 犬elisa检测试剂盒
- 猫elisa检测试剂盒
- 绵羊elisa检测试剂盒
- 马elisa检测试剂盒
- 牛elisa检测试剂盒
- 大鼠elisa检测试剂盒
- 鸡elisa检测试剂盒
- 其它elisa检测试剂盒
- ATCC细胞
- 菌种
- 标准品
- 化工产品
- 脂肪酸类
- 化学试剂
- 生化试剂
- 试剂盒
- Elisa检测试剂盒
- 细胞
- 对照品/标准品
- RNA/DNA提取
- 原代细胞
- 培养基
- PCR检测试剂盒
- 美国DRG试剂盒
- 科研抗体
- 生化检测试剂盒
- 科研抗体
- 进口品牌
- 常用标准
- 标准滴定溶液
- XVB标准试液
- 标准指示液
- 生物染色液
- 标准缓冲溶液
- 元素标准溶液
- 纯化水检测试剂
- 锅炉水质分析
- 病理试剂
- 检测试剂
- 生物碱
- 黄酮
- 查尔酮
- 氧杂蒽酮
- 木脂素
- 香豆素
- 苯丙素
- 药物杂质及中间体
- 其它天然产物
- 蒽醌
- 其它醌类
- 甾体
- 二萜
- 其它萜类
- 环烯醚萜
- 倍半萜
- 其它酚类
- 三萜
- 进口检测试剂盒
- PCR试剂盒
- ELISA Kit
- 细胞生物学
- 耗材和仪器
- LAMP试剂盒
- 进口抗体
- FOR ELISA Kit
- PCR基因检测试剂盒
- 鉴定PCR试剂盒
- 进口PCR试剂
- B&I试剂盒
- 小分子试剂
- 细胞系
- 蛋白与多肽
推荐产品
公司新闻/正文
PCR （聚合酶链式反应）扩增程序循环步骤
384 人阅读发布时间：2025-07-10 11:21
PCR（聚合酶链式反应）是一种用于扩增特定DNA片段的技术，它通过模拟生物体内DNA复制的过程，在体外将目标DNA序列进行指数级扩增。这项技术由Kary Mullis在1983年发明，并因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。PCR的基本原理包括三个主要步骤：变性、退火和延伸，这三步构成了一个循环，通过多次循环，可以将目标DNA片段扩增数百万倍。
引物设计原则：
一、变性（Denaturation）：
实验问题解决：
引物设计原则：
- 同源性与特异性：引物应与目标序列完全匹配，避免引物内部或彼此之间形成二聚体。
- 长度与退火温度：引物长度通常为18-24个碱基，确保每对引物的退火温度相近，这有助于提高扩增效率和特异性。
- 避免互补性：引物不应与非目标序列互补，以减少非特异性扩增。
一、变性（Denaturation）：
- 温度：93℃左右
- 时间：通常为30秒至2分钟
- 过程：在此阶段，双链DNA模板被加热至高温，导致氢键断裂，双链解离成两条单链。这个步骤使得DNA分子的两条链分开，为后续的引物结合和复制做好准备。
- 温度：55℃左右，具体取决于引物的Tm值
- 时间：通常为30秒
- 过程：温度下降后，引物与模板DNA单链的互补序列结合。引物是预先设计的短DNA序列，能够特异性地与目标区域配对。
- 温度：72℃左右，这是Taq DNA聚合酶的最佳活性温度
- 时间：通常为1分钟，根据目标片段的长度可能有所不同
- 过程：在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP（脱氧核苷三磷酸）为原料，按照碱基互补配对原则，从引物的3'端开始合成新的DNA链。新链的合成方向是从5'到3'。
实验问题解决：
- 无条带：检查模板、引物、酶的活性，尝试以第一次PCR产物作为模板再扩增。
- 引物二聚体：降低引物浓度，优化退火温度。
- 条带弥散：可能是DNA降解或PCR抑制剂的影响，需检查反应体系的纯度和抑制剂的存在。