悬浮细胞传代培养及悬浮细胞不容易转染分析

512 人阅读发布时间：2024-05-27 15:59

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法，贴壁细胞需经消化后才能分瓶，而悬浮型细胞直接分瓶就可以，因为它不贴壁，所以也不需要借助胰蛋白酶消化。

具体过程如下：
1. 取状态良好的细胞，在生物安全柜中操作，用移液管把细胞轻柔吹打均匀。
2. 把细胞悬液转移到15mL离心管中，1000 rpm离心5 min。
3. 轻轻吸去上清后用完全培养基重悬细胞，按照1皿细胞传2皿或3皿比例进行传代，把细胞悬液一分为二或者一分为三后分别转移到新的培养皿中。
4. 接种好的细胞，应在培养皿上标记上细胞名称、细胞代数、传代日期和操作人姓名，轻轻摇匀后转移到37℃、5%CO2培养箱中培养。
5. 细胞培养24h后，根据培养基的颜色及细胞的生长密度进行后续相应的操作（更换新鲜培养基或再次传代处理或进行冻存处理）。

注意事项：
1. 把握传代时机，在80%~90%汇合阶段最好，过早传代细胞产量少，过晚细胞健康状态不佳。
2. 注意无菌操作：整个培养过程中保证无菌操作，包括操作前要洗手，进入超净台前要用75%酒精擦拭，试剂等瓶要75%酒精喷浴后才能放入超净台。
3. 操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。同时不能用手触碰已消毒的工作部分，工作台面上用品布局要合理。
4. 不同细胞、不同操作之间需要换枪头，避免污染。

悬浮细胞不容易转染的原因主要有以下几点：
1.细胞密度问题：悬浮细胞通常在高浓度下分散生长，但过高的细胞密度会导致细胞堆积、凝固，降低细胞与试剂的接触，从而影响转染效率。
2.细胞凝聚问题：悬浮细胞在长时间培养后容易形成聚集体，使转染试剂难以渗透到细胞内部，影响转染效率。
3.细胞质膜结构的限制：悬浮细胞的质膜结构复杂，容易对外来物质产生排斥，因此常规的转染试剂中添加的穿透性、毒性较强的组分可能会影响细胞的健康和转染效果。
4.转染试剂的选择问题：悬浮细胞对不同类型的转染试剂效果会有差异，所以选择合适的转染试剂是提高转染效率的关键。
5.转染方法的问题：目前大多数实验室使用的是脂质体类的转染试剂，这种转染方法基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，然后散布在细胞周围，通过细胞的内吞作用将目的基因导入细胞内。然而，这种方法对悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞，因为脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍。
为了提高悬浮细胞的转染效率，可以考虑使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的转染试剂。另外，电击方法也被认为是一种有效的悬浮细胞转染方法，但需要注意电击会对细胞造成一定的损伤，因此选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，如Entranster-E，可以将电击对细胞的伤害降到最低。

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