ELISA实验标准曲线问题解析

852 人阅读发布时间：2024-05-06 16:58

酶联免疫吸附实验（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是将抗原或抗体结合在固相载体表面，利用抗原抗体的特异性结合以及抗体或者抗原上标记的酶催化特定底物发生显色反应，实现目标物检测的免疫分析方法，可测至皮摩尔（pmol）级别。酶联免疫吸附分析（下称ELISA）是免疫分析的一种，分三个部分组成：免疫识别，信号输出和数据处理。标准曲线做的好与坏会直接影响到ELISA实验的结果，甚至是关系到实验的成败。
ELISA技术原理:
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ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
1、将已知的抗体或抗原结合在某种固相载体上，并保持其免疫活性。
2、测定时，将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。
3、用洗涤的方法分离抗原-抗体复合物和游离成分。
4、加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量。

下面对ELISA实验标准曲线的技术解答内容：
1.设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度*陡段，即曲线几乎成直线的范围内。
2.采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
3.样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。
4.做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。
6.检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。
7.标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。
绘制标准曲线方法：
标准曲线浓度得到后，可通过计算器、Excell或SPSS统计软件进行绘制，并得到相关的回归方程（即计算公式）和相关系数（回归系数）。Excell软件比较好用一些；SPSS也行，不过是英文的，初学者不是很容易掌握；计算器嘛太麻烦了，所以现在一般不用。

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