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公司新闻/正文
关于蛋白免疫印迹(WB)蛋白提取制备
790 人阅读发布时间：2022-09-21 15:27
蛋白免疫印迹（ Western Blot，WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰an 电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。 WB 是进行蛋白质分析最流xing和成熟的技术之一。蛋白样品制备是 Western Blotting 的第一步，是决定 WB 成败的关键步骤之一。
蛋白样本提取制备:
1 细胞或组织裂解
2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂
3 蛋白定量
4 电泳上样样品的准备
蛋白提取总体原则与注意事项包括：
1、尽可能提取完全或降低样本复杂度使得集中于提取目的蛋白（通过采用不同提取方法或选择不同的试剂盒产品）。
2、保证蛋白处于可以溶解状态（通过裂解液的pH 、盐浓度、 表面活性剂、还原剂等的选择实现）。
3、提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等（全程保证在冰盒中低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）。
4、尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采取不同提取策略）。
5、样品分装，长期于-80℃中保存，避免反复冻融。
蛋白样本提取制备:
1 细胞或组织裂解
2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂
3 蛋白定量
4 电泳上样样品的准备
蛋白提取总体原则与注意事项包括：
1、尽可能提取完全或降低样本复杂度使得集中于提取目的蛋白（通过采用不同提取方法或选择不同的试剂盒产品）。
2、保证蛋白处于可以溶解状态（通过裂解液的pH 、盐浓度、 表面活性剂、还原剂等的选择实现）。
3、提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等（全程保证在冰盒中低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）。
4、尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采取不同提取策略）。
5、样品分装，长期于-80℃中保存，避免反复冻融。