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了解抗原抗体反应相关知识合集
人阅读 发布时间:2022-02-15 14:08
抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。这种反应既可在机体内进行,也可以在机体外进行。抗原抗体反应的过程是经过一系列的化学和物理变化,包括抗原抗体特异性结合和非特异性促凝聚两个阶段,以及由亲水胶体转为疏水胶体的变化。
原理:
抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇(表位)和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。
抗原决定簇 = 表位。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的抗原表位和抗体超变区必须密切接触。
结合力:
抗原抗体是一种非共价的结合,不形成共价键,需要四种分子间引力参与。
1、静电引力,特点:引力与两电荷间的距离的平方成反比;
2、范德华引力,特点:四种分子间作用力之中最小的力;
3、氢键结合力,特点:四种分子间作用力之中最具有特异性的力;
4、疏水作用力,特点:四种分子间作用力之中最大的力。
亲合力:
1、亲和力和亲合力
(1) 亲和力 (affinity),是指抗体单价 Fab 片段与单价抗原表位的结合能力。抗原抗体结合反应的平衡常数 K 可反映出亲和力的大小,K 值越大,抗体的亲和力越高,反之亦然。它是抗原抗体间固有的结合力。亲和力用平衡常数 K 来表示,K 值越大,亲和性越强,与抗原结合也越牢固。
(2) 亲合力,指抗体结合部位与抗原表位间结合的强度,与抗体结合价相关,即所谓多价优势。抗体亲合力强,与抗原结合牢固,不易解离。亲合力与亲和力、抗原的有效抗原表位相关。
2、亲水胶体转化为疏水胶体
抗体是球蛋白,大多数抗原亦为蛋白质。在通常的血清学反应条件下,抗原抗体均带负电荷,使极化的水分子在其周围形成水化层,成为亲水胶体,因此蛋白质分子不会相互凝集或沉淀。当抗原与抗体结合后,使表面电荷减少,水化层变薄甚至消失,蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。此时,在一定浓度的电解质作用下,则可以中和胶体粒子表面的电荷,使各疏水胶体进-步靠拢,形成可见的抗原抗体复合物。
抗原抗体反应的特点主要有三性:
即特异性、比例性、可逆性。
1、特异性是抗原抗体反应的最主要特征,这种特异性是由抗原决定簇和抗体分子的超变区之间空间结构的互补性确定的。这种高度的特异性在传染病的诊断与防治方面得到有效的应用。随着免疫学技术的发展进步,还将在医学和生物学领域得到更加深入和广泛的应用,比如肿瘤的诊断和特异性治疗等。
2、比例性是指抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系,只有当二者浓度比例适当时才出现可见反应,在抗原抗体比例相当或抗原稍过剩的情况下,反应最彻底,形成的免疫复合物沉淀最多、最大。而当抗原抗体比例超过此范围时,反应速度和沉淀物量都会迅速降低甚至不出现抗原抗体反应。
3、可逆性是指抗原抗体结合形成复合物后,在一定条件下又可解离恢复为抗原与抗体的特性。由于抗原抗体反应是分子表面的非共价键结合,所形成的复合物并不牢固,可以随时解离,解离后的抗原抗体仍保持原来的理化特征和生物学活性。
影响抗原抗体反应因素:
一、反应物自身因素
1、抗原因素 抗原的理化性状、表位数量和种类及数目均可影响反应结果。颗粒性抗原出现凝集反应,可溶性抗原出现沉淀反应。单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。
2、抗体因素 抗体的来源、浓度、特异性和亲和力都影响抗原抗体反应,为提高试验的可靠性,应选择高特异性、高亲和力的抗体作为诊断试剂。等价带的宽窄也影响抗原抗体复合物的形成,单克隆抗体不适用于沉淀反应。
二、环境因素
1、电解质:抗原和抗体通常为蛋白质分子,等电点分别为 pH 3~5 和 pH 5~6,在中性或: 弱碱性的环境中,表面均带负电荷,适当浓度的电解质会使他们失去一部分负电荷而相互结合,出现肉眼可见的凝集或沉淀现象:在抗原抗体反应中,常用 0.85% 的 NaCI 溶液或各种缓冲液作为抗原、抗体的稀释液,以提供适当浓度的电解质。
2、温度:抗原抗体反应必须在适宜的温度中进行,一般为 15~40℃,通常最适为 37℃。一定范围内,温度升高,可促进抗原抗体分子问的碰撞机会,加速抗原抗体复合物的形成,加快可见反应的速度,若温度高于 56℃,可导致已结合的抗原抗体再解离,甚至变性或破坏;温度越低,结合速度越慢,但结合牢固,易于观察。某些特殊的抗原抗体反应,对反应温度有特殊要求,如冷凝集素在 4℃ 左右与红细胞结合最好,20℃ 以上反而解离。
3、酸碱度:抗原抗体反应必须在合适的酸碱度环境中进行,pH 过高或过低都将影响抗原: 抗体的理化性质,抗原抗体反应的最适酸碱度为 pH 6~8。此外,当 pH 达到或接近颗粒性抗原的等电点时,即使没有相应抗体存在时,也会引起抗原非特异性凝集,即自凝,造成假阳性反应,严重影响试验的可靠性。
三、反应基质因素
反应基质因素是指干扰抗原和抗体间反应但与分析物本身无关的非特异性因素,主要包括蛋白、盐、补体、抗免疫球蛋白抗体 (类风湿因子和人抗鼠抗体)、药物和可能污染标本的物质。通过实验设计可减少反应基质因素的影响。