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上海抚生实业有限公司
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报告基因实验步骤及应用
人阅读 发布时间：2021-12-14 15:59
报告基因是一个分子生物学概念，它是指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：
①已被克隆和全序列已测定；
②表达产物在受体细胞中本不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物；
③其表达产物能进行定量测定。
1. 取少量（5~50 mg ) 叶片、根、愈伤等组织样品，所需样品量由材料决定。
2. 离心管中加入 GUS 缓冲液（50~200 ul），组织匀浆。
3. 16000 g，4℃ 离心 15 min，沉淀破碎的细胞。
4. 检测提取物的蛋白质浓度。
5. 用 GUS 缓冲液稀释提取物，使蛋白质总浓度为 0.1 mg/ ml。
6. 立即使用提取物，或者 -80℃ 保存。
二、原生质体制备
1. 通过离心（50 g，1 min），小份（1x106）收集转化的原生质体，用 2 ml 的 3 M 缓冲液重悬。
2. 取一份原生质体，用血细胞计数板计数。
3. 将剩余的原生质体 50 g 离心 1 min，用 150 ul 的 GUS 缓冲液重悬，短暂涡旋（或者通过 26 G 的抽吸），静置 5 min。
4. 离心（16000 g，4℃ 15 min ) ，使细胞碎片沉淀。检测提取物的蛋白质浓度，参照完整组织样品的方法对其进行稀释。
报告基因实验可以用于：
（1）植物分子生物学研究；
（2）用以鉴别基因的表达模式；
（3）在获得稳定转化植株的过程中也可用作转化细胞的标记。
①已被克隆和全序列已测定；
②表达产物在受体细胞中本不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物；
③其表达产物能进行定量测定。
报告基因实验步骤：
1. 取少量（5~50 mg ) 叶片、根、愈伤等组织样品，所需样品量由材料决定。
2. 离心管中加入 GUS 缓冲液（50~200 ul），组织匀浆。
3. 16000 g，4℃ 离心 15 min，沉淀破碎的细胞。
4. 检测提取物的蛋白质浓度。
5. 用 GUS 缓冲液稀释提取物，使蛋白质总浓度为 0.1 mg/ ml。
6. 立即使用提取物，或者 -80℃ 保存。
二、原生质体制备
1. 通过离心（50 g，1 min），小份（1x106）收集转化的原生质体，用 2 ml 的 3 M 缓冲液重悬。
2. 取一份原生质体，用血细胞计数板计数。
3. 将剩余的原生质体 50 g 离心 1 min，用 150 ul 的 GUS 缓冲液重悬，短暂涡旋（或者通过 26 G 的抽吸），静置 5 min。
4. 离心（16000 g，4℃ 15 min ) ，使细胞碎片沉淀。检测提取物的蛋白质浓度，参照完整组织样品的方法对其进行稀释。
报告基因实验可以用于：
（1）植物分子生物学研究；
（2）用以鉴别基因的表达模式；
（3）在获得稳定转化植株的过程中也可用作转化细胞的标记。
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