RNA提取纯化原理及操作步骤

原理(异硫氰酸胍-酚-lv仿一步法）：

TRIZ0L试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯fen,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RN与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入lv仿时,它可抽提酸性的苯fen，而酸性苯fen可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。

                                                  

操作步骤：

①细胞或组织,加入0.4ml TRIZOL试剂后匀浆

③加入1/5 TRIZOL试剂体积量的lv仿,剧烈震荡混匀

④室温静置5分钟,12000g 4℃离心15分钟

⑤将上清液转移至新的离心管中,加入与上清液等体积的异丙醇,颠倒混匀

⑥室温静置10分钟,12000g 4℃离心10分钟,弃上清

⑦向沉淀中加入1ml的75%乙醇的清洗沉淀，12000g 4℃离心5分钟

⑧弃上清保留沉淀,干燥

⑨沉淀物溶解于11μl的DEPC处理水中