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大鼠Elisa试剂盒以下的各个操作步骤

发布时间:2020-09-16 13:34 |  点击次数:

大鼠Elisa试剂盒标本的采集及保存:

1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

4. 大鼠Elisa试剂盒培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右 (2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组 织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

Goitrine    表告依春    20mg    C4H9NO3    119.12

Gomisin G    戈米辛G    10mg    "C13H8O6

"    "260.20"

Gracillin    纤细薯蓣皂苷    20mg    C16H12O5    284.26

Griffonilide    格列风内酯    20mg    C5H8N2O5    176.13

Guaiacol    愈创木酚    20mg    C7H6O4    154.12

Guanine    鸟嘌呤    10mg    C14H10O6    "274.23"

Gynostemma Pentaphyllum P.E. Gypenoside    绞股蓝皂苷    20mg    C20H34O4    338.48

Gypenoside XLIX    绞股蓝皂苷XLIX    20mg    C18H19NO4    313.351

Hanzhiside methyl ester    山栀苷甲酯    20mg    C10H12O    148.2

Harmine Hydrochloride     盐酸去氢骆驼蓬碱            

Harmine?    去氢骆驼蓬碱    20mg    C21H22NO4+    352.4

大鼠Elisa试剂盒操作步骤:

1. 加标准品:在酶标包被板上设标准品孔,依次加入不同浓度的标准品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,然后再加样品亲和素10μl。加样
将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔大鼠Elisa试剂盒加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:除空白孔外每孔加入酶标试剂50μl。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

Pristimerin    扁塑藤素    20mg    C6H8O6    176.12

Procyanidin    原花青素(UV98%)    20mg    C15H14O6    290.27

Procyanidin B1    原花青素B1(95%)    20mg    C22H18O11    458.37

Procyanidin B2    原花青素B2    20mg    C22H18O10    442.37

Propyl gallate    没食子酸丙酯    20mg    C29H36O15    624.59

Propylparaben    尼泊金丙    20mg    C9H8O4    180.16

Protocatechualdehyde    原儿茶醛    20mg    C15H14O7    306.27

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔大鼠Elisa试剂盒的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。