三七素药代动力学研究

三七素(Dencichine)，其化学名为β-草酰基-L-α，β-二氨基丙suan，是一种非蛋白氨基酸。药理研究证明，三七素在多种出血模型中均具有明显的预防性和治疗性的止血作用。缩短全血凝血时间、促进血液凝固、减少血浆tPA水平并降低纤维蛋白溶解活性是三七素止血作用的直接原因。此外，发现三七素具有神经毒性，在低剂量的时候，三七素有止血作用，而高剂量的时候，则具有神经毒性。
　　为了把三七素发展成为临床医学上可用的安全的止血药物，本论文对三七素在犬和大鼠体内药物动力学进行研究，阐述三七素在犬和大鼠体内的动力学规律;同时研究三七素对大鼠体内的血浆蛋白结合率进行了研究，为三七素的药理和毒理以及临床研究提供了有效的指导。
　　本论文的主要创新点在于，开发了一种高效的分析方法。之前关于三七素在生物血浆样品内的含量的文献报道并不是很多，其中能达到较好灵敏度的，都采用了衍生化的方法，但是衍生化反应为可逆过程，对其反应程度难于定量计算，重复性不好，误差较大，准确度不高，因此我们建立的方法，既避免了衍生法的操作繁复的缺点，同时还提高了灵敏度和重复性。
　　三七素在犬和大鼠体内的药物动力学研究
　　为了定量三七素在生物样品中的含量，我们建立了高效、专属、灵敏的液相色谱串联质谱法测定生物样品中三七素的方法，羧甲司坦作为内标物质，用yi腈蛋白沉淀后，三七素和内标在Xterra MS-C18（2.1*150mmLD，5μm，美国Waters公司）色谱柱上得到分离，色谱条件流动相:20mmol·L-1乙酸铵水溶液-yi腈=A-B，流速:0.2ml·min-1。我们使用三重四级杆质谱的正离子模式进行检测，检测方式为多反应监控(MRM)，离子源为电喷雾离子化模式(ESI)，三七素的母离子和子离子m/z分别为177.2、116.2;羧甲司坦的母离子和子离子m/z分别为180.2、163.2。本实验中三七素的日间和日内精密度均小于6.7％，回收率大于85％，最低定量限为20ng/mL，符合生物样品分析要求。
　　大鼠单剂量i.v.1、5和25mg/kg三七素后，估算的半衰期分别为1.5±1.1，2.8±1.1和5.1±3.5h。犬单剂量i.v.0.5、2和8 mg/kg三七素后，估算的半衰期分别为3.7±0.3，2.9±1.1和3.6±1.6h。在给药剂量范围内，三七素在犬和大鼠体内的动力学为线性动力学。通过三七素在动物体内的动力学行为进行研究，为三七素的临床试验提供了指导和依据。
　　三七素在大鼠体内血浆蛋白结合率实验研究
　　对药物进行血浆蛋白结合率研究可以为药物的相互作用提供参考，测定不同浓度三七素在大鼠血浆中的蛋白结合率。在0.2μg/mL，1μg/mL，3μg/mL，10μ g/mL四个浓度水平下的三七素的血浆蛋白结合率分别为:10.50±0.045％,18.12±0.074％,17.21±0.068％,16.44±0.061％。