引物或探针发生降解后，应采取哪些补救措施？

引物或探针一旦降解便无法修复，补救措施是重新合成高质量的引物或探针，并通过规范的储存和使用方式防止问题再次发生‌。

虽然降解的试剂无法“起死回生”，但可以通过以下系统性操作最大限度减少损失并保障后续实验顺利进行：

1、立即更换并验证新批次‌

重新合成‌：联系原供应商或更换更高纯度级别（如HPLC或PAGE纯化）的合成服务，优先选择提供质检报告（如电泳图、OD值）的产品。

质量验证‌：新引物到货后，务必进行‌PAGE电泳检测‌，确认条带清晰、无弥散；同时测定‌OD260/280比值‌（理想值1.8–2.0），排除污染。

2、优化储存条件以延长稳定性

分装保存‌：将储备液按单次用量小量分装，避免反复冻融导致的物理断裂。

选择合适溶剂‌：使用含0.1 mM EDTA的TE缓冲液（pH 8.0）溶解，可有效抑制核酸酶活性，比纯水更稳定。

控制温度与光照‌：未标记引物存于–20℃，长期保存建议–80℃；荧光标记探针必须避光、4℃短期存放或–20℃长期保存，防止荧光基团光解。

3、规范操作流程减少损耗

工作液现用现配，避免在室温下长时间暴露。

使用无核酸酶的离心管和枪头，操作时佩戴手套，防止外源酶污染。

定期校准移液器，确保加样准确，避免因体积误差影响反应体系。

特别提醒：即使外观无异常，若实验出现无Ct值、扩增效率下降或非特异性产物，也应怀疑引物/探针质量问题，及时进行电泳复检。