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12 人阅读发布时间:2026-03-12 09:15
培养基是否出现沉淀,可通过肉眼观察、显微镜检查及排除污染等方式综合判断。关键在于区分是物理性析出(如盐类结晶、蛋白沉淀)还是生物性污染(如细菌、真菌),避免误判影响实验进程。
一、肉眼观察:初步判断沉淀是否存在
浑浊与沉淀形态
正常培养基应澄清透明(贴壁细胞)或轻微均匀浑浊(某些悬浮细胞系)。
若出现絮状、颗粒状、团块状或丝状物沉于瓶底或悬浮于液体中,提示可能有沉淀。
静置后沉淀是否“像云雾一样散开”或漂浮物是否随液体晃动而移动,有助于判断其性质。
颜色变化
含酚红的培养基在pH正常时呈红色或粉红色。
若培养基变黄,可能是细菌污染导致产酸;若保持红色但出现浑浊,则更倾向为非污染性沉淀。
沉淀位置
沉淀多出现在瓶底、液面与瓶壁交界处或培养皿边缘,尤其在低温储存后更明显。
二、显微镜检查:进一步确认沉淀性质
在倒置显微镜下观察:
真菌污染:可见菌丝、芽殖结构或运动性菌体,具有固定形态和生长趋势。
细胞碎片:无规则片状,无运动性,数量不随时间增加。
蛋白或盐类沉淀:呈静态颗粒,无生命特征,常见于血清或浓缩液复温不充分时。
注意:血清中的脂蛋白沉淀在37℃孵育后会溶解,而真菌或细菌污染则不会消失。
三、排除污染:确认是否为“假污染”
以下情况虽表现为浑浊或沉淀,但并非污染,不影响细胞生长:
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原因 |
特征 |
处理方式 |
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温度变化引起的析出 |
冷藏后出现微小颗粒,37℃复温摇匀后溶解 |
37℃水浴复溶,轻柔混匀后使用 |
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钙盐、磷酸盐沉淀 |
高浓度DMEM或无血清培养基易发生,尤其pH偏碱时 |
调整pH,单独溶解CaCl₂,使用超纯水配制 |
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血清蛋白沉淀 |
解冻后出现白色絮状物,静置可沉降 |
37℃水浴完全溶解,避免反复冻融 |
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金属元素沉淀 |
铁、锌、铜等在氧化或pH异常时析出 |
添加转铁蛋白结合铁,控制储存条件 |
四、如何区分沉淀与污染?关键对比点
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特征 |
非污染性沉淀 |
细菌污染 |
真菌污染 |
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出现速度 |
储存后缓慢出现或复温时出现 |
数小时内迅速浑浊 |
数天内逐渐出现 |
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浑浊类型 |
颗粒状、絮状但分布不均 |
乳白色均匀浑浊 |
绒毛状、丝状漂浮物 |
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pH变化 |
通常不变或轻微波动 |
快速变黄(pH↓) |
可能不变或变深 |
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显微镜下 |
无生命结构,无运动 |
可见杆状/球状菌 |
可见菌丝、孢子 |
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37℃孵育后 |
部分沉淀溶解 |
浑浊加重 |
漂浮物增多扩散 |
提示:若不确定,可取少量培养基进行革兰染色或涂片镜检,或接种于营养肉汤中观察是否有微生物生长。