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    上海

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    细胞库 / 细胞培养、试剂、实验室仪器 / 设备、技术服务、耗材

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怎样判定培养基发生沉淀现象?

12 人阅读发布时间:2026-03-12 09:15

培养基是否出现沉淀,可通过肉眼观察、显微镜检查及排除污染等方式综合判断。关键在于区分是‌物理性析出‌(如盐类结晶、蛋白沉淀)还是‌生物性污染‌(如细菌、真菌),避免误判影响实验进程。

一、肉眼观察:初步判断沉淀是否存在

浑浊与沉淀形态

正常培养基应澄清透明(贴壁细胞)或轻微均匀浑浊(某些悬浮细胞系)。

若出现‌絮状、颗粒状、团块状或丝状物‌沉于瓶底或悬浮于液体中,提示可能有沉淀。

静置后沉淀是否“像云雾一样散开”或漂浮物是否随液体晃动而移动,有助于判断其性质。

颜色变化

含酚红的培养基在pH正常时呈红色或粉红色。

若培养基变黄,可能是细菌污染导致产酸;若保持红色但出现浑浊,则更倾向为非污染性沉淀。

沉淀位置

沉淀多出现在瓶底、液面与瓶壁交界处或培养皿边缘,尤其在低温储存后更明显。

二、显微镜检查:进一步确认沉淀性质

在倒置显微镜下观察:

真菌污染‌:可见菌丝、芽殖结构或运动性菌体,具有固定形态和生长趋势。

细胞碎片‌:无规则片状,无运动性,数量不随时间增加。

蛋白或盐类沉淀‌:呈静态颗粒,无生命特征,常见于血清或浓缩液复温不充分时。

注意:血清中的脂蛋白沉淀在37℃孵育后会溶解,而真菌或细菌污染则不会消失。

三、排除污染:确认是否为“假污染”

以下情况虽表现为浑浊或沉淀,但‌并非污染‌,不影响细胞生长:

原因

特征

处理方式

温度变化引起的析出

冷藏后出现微小颗粒,37℃复温摇匀后溶解

37℃水浴复溶,轻柔混匀后使用

钙盐、磷酸盐沉淀

高浓度DMEM或无血清培养基易发生,尤其pH偏碱时

调整pH,单独溶解CaCl₂,使用超纯水配制

血清蛋白沉淀

解冻后出现白色絮状物,静置可沉降

37℃水浴完全溶解,避免反复冻融

金属元素沉淀

铁、锌、铜等在氧化或pH异常时析出

添加转铁蛋白结合铁,控制储存条件

四、如何区分沉淀与污染?关键对比点

特征

非污染性沉淀

细菌污染

真菌污染

出现速度

储存后缓慢出现或复温时出现

数小时内迅速浑浊

数天内逐渐出现

浑浊类型

颗粒状、絮状但分布不均

乳白色均匀浑浊

绒毛状、丝状漂浮物

pH变化

通常不变或轻微波动

快速变黄(pH↓)

可能不变或变深

显微镜下

无生命结构,无运动

可见杆状/球状菌

可见菌丝、孢子

37℃孵育后

部分沉淀溶解

浑浊加重

漂浮物增多扩散

提示:若不确定,可取少量培养基进行革兰染色或涂片镜检,或接种于营养肉汤中观察是否有微生物生长。

 

 

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