如何防止ELISA标准品稀释液引发的基质效应？

在ELISA检测中，基质效应指的是样本中除目标分析物外的其他成分（如蛋白、脂质、金属离子等）干扰抗体-抗原结合或酶活性，从而影响检测准确性。这种干扰常见于血清、血浆等复杂生物样本，表现为标准曲线偏离、回收率异常或OD值低于空白孔。

由于试剂盒的标准品通常溶解在人工缓冲液中，而待测样本则处于天然生物基质中，两者之间的物理化学性质差异会导致结合效率不同，进而引发系统性误差。因此，仅靠优化样本处理不足以完全消除该问题，必须从标准品稀释液的设计入手进行匹配。

避免基质效应的核心策略：标准品稀释液优化

1.使用“基质匹配”的标准品稀释液

理想的标准品稀释液应模拟真实样本的组成，以最小化基质差异：

若检测血清/血浆样本，应选择含有惰性蛋白载体（如BSA、酪蛋白）和非特异性动物IgG的稀释液；

最优方案是使用血清基质校准品，即标准品直接溶于去抗原的人血清中，确保与待测样本环境一致。

许多高质量ELISA试剂盒（如Eaivelly、菲恩生物）会在配套说明书中明确标注其标准品稀释液为“血清基质型”，并附有回收率测试数据（通常在80%-120%范围内）。

2.添加阻断剂以抑制交叉反应

某些干扰成分可通过添加特定阻断剂来中和：

异嗜性抗体（HAMA）：可在稀释液中加入非相关动物IgG或商业阻断剂，防止其桥联捕获与检测抗体；

补体或类风湿因子：使用热灭活血清作为稀释基础，或添加EDTA螯合钙镁离子。

3.统一稀释体系：样本与标准品使用同种稀释液

务必保证样本稀释液与标准品稀释液为同一配方，否则即使标准曲线良好，也无法准确反映样本浓度。这是实验设计中最常被忽视却极为关键的一点。

实践建议与质量控制

回收率实验：在样本中加入已知浓度的标准品，计算实测增量与理论添加量的比例。若回收率在80%-120%之间，则认为基质效应可控。

平行稀释实验：将高浓度样本梯度稀释后绘制曲线，若与标准曲线平行（R² > 0.95），说明无显著基质干扰。

优先选用经过严格测试的试剂盒：正规厂商会在产品开发阶段完成线性稀释和掺入回收实验，并将结果记录在说明书内。

要有效避免ELISA中的基质效应，最关键的操作是 使用与待测样本基质一致的标准品稀释液，推荐选择含BSA/Tween-20的封闭缓冲液或直接采购带有血清基质的校准品。同时配合回收率和平行稀释验证，确保定量结果的真实可靠。