细胞换液是指在细胞培养过程中,定期或在特定情况下更换细胞培养基的过程。这一操作对于维持细胞的健康生长至关重要。
细胞换液过程中导致污染的常见原因主要包括操作不规范、耗材污染和环境管理不当三大类。以下是具体分析:
一、操作不规范
无菌意识薄弱:操作前未彻底洗手或更换手套,说话、咳嗽时未遮挡导致飞沫污染。
操作失误:反复打开培养瓶盖暴露时间过长,移液枪头接触非无菌表面(如瓶口外侧、桌面)。
交叉污染:共用吸头、培养液混用或操作不同细胞系时未严格区分工具。
二、耗材与试剂污染
耗材灭菌不彻底:使用非无菌或过期培养瓶、枪头,或自行灭菌的器皿未达到无菌标准。
试剂本身污染:血清、培养基等在生产或运输中携带支原体、细菌;配制培养基时使用污染的水或添加剂。
试剂储存不当:反复冻融或长期室温存放导致微生物滋生。
三、环境管理不当
超净台使用不当:未提前开启紫外灯消毒或操作时频繁开关门,引入外界污染物。
培养箱维护不足:长期未清洁内部,托盘积水滋生细菌或霉菌;温湿度/CO₂浓度不稳定影响细胞抵抗力。
实验室环境问题:通风系统不完善,空气中灰尘或微生物积聚;附近扬尘作业通过通风口进入培养室。
四、建议
1、严格无菌操作:在超净台内操作,佩戴手套、口罩,避免随意交谈。
2、定期消毒环境:超净台和细胞房应保持整洁,定期用酒精和紫外灯消毒。
3、检查器材和试剂:确保所有使用的器材和试剂都经过灭菌处理,避免使用过期物品。
4、监控培养箱:定期检查培养箱的水盘,及时更换并消毒,避免污染扩散。
通过规范操作、严格环境管理和使用合格耗材,可有效降低换液污染风险。