实验室细胞培养过程步骤分述

308 人阅读发布时间：2025-01-07 10:47

细胞培养又称细胞克隆技术，细胞培养是指在人工创造的与体内环境相似的条件下（比如适宜的温度、pH，以及一定的营养），使细胞生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种技术。
一、细胞培养种类：
根据细胞种类的不同细胞培养分为原代培养和传代培养。根据细胞生长特点的不同又可分为贴壁培养和悬浮培养。
1.传代培养：细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。培养细胞的“一代”，不表示细胞分裂一次，而是指培养细胞从接种到再次转移培养的过程。在一次传代培养中，细胞能倍增3-6次。
2.原代培养：取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。
3.贴壁培养：必须贴附于支持物表面才能生长。多为各种实体瘤细胞。
4.悬浮培养：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。多为各种造血系统肿瘤细胞。

二、细胞生长过程：
游离期；贴壁期；潜伏期；对数生长期；停止期（平台期）
1.游离期：细胞接种后在培养基中呈悬浮状态，也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形（10min-5h）。
2.贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。大部分细胞株在10min－5h内贴壁。底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等血清中有促使细胞贴壁的球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再附着在吸附有促贴壁因子的底物上。高级培养瓶多涂有生长基质以帮助细胞贴附。
3.潜伏期：此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24h。
4.对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。
5.停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂。机制：接触抑制、密度依赖性。

三、细胞培养步骤:
一、准备工作:
* 清洁和消毒所有工作台面、工具和培养容器,通常使用70%酒精擦拭。
* 穿戴适当的实验室防护装备,如实验服、套和口罩。
二、培养基的制备:
* 根据所需细胞类型,配制适宜的培养基,这通常包括基础培养基、血清、抗生素和其他生长因子。
* 确保所有培养基成分均为无菌, 并在37°C、5% CO?的恒温箱中预热。
三、细胞传代:
* 从现有细胞培养中取出一部分细胞,通常使用胰蛋白酶-EDTA溶液消化细胞。
* 将消化后的细胞悬液转移到新的培养瓶中,加入适量的培养基,以稀释细胞并促进其生长。
四、培养细胞:
* 将含有细胞的培养瓶放入恒温箱中,维持适宜的温度、湿度和CO?浓度。
* 定期观察细胞生长情况,使用倒置显微镜检查细胞形态和密度。
五、细胞收获:
* 当细胞达到适当的生长密度时,再次使用胰蛋白酶EDTA溶液消化细胞。
* 收集细胞悬液,并通过离心分离细胞。
六、细胞计数和种植:
* 使用细胞计数板或自动细胞计数器计算细胞数量。
* 根据实验需要,将细胞种植到新的培养容器中。
七、细胞冻存:
* 如果需要长期保存细胞,可以在细胞生长至对数生长期时进行冻存。
* 将细胞与冻存保护剂混合,缓慢冷却至-80°C ,然后转移到液氮罐中保存。
八、质量控制:
* 定期进行细胞株的鉴定,以确保其身份和纯度。
* 检测细胞培养中的微生物污染,如细菌、真菌和病毒。
九、废弃物处理:
* 所有使用过的培养基、细胞悬液和其他废弃物都应按照生物危险废物处理规定进行处置。
* 请注意,这些步骤是通用的,并可能需要根据特定细胞类型、实验目的和实验室条件进行调整。在进行细胞培养时,应严格遵守无菌操作规程,以避免污染。此外,对于特定的细胞类型,可能还需要额外的培养条件和培养基配方。

ELISA试验测定条件的配置技巧

原代细胞分离培养方法及应用介绍

更多资讯

我的询价

上海抚生实业有限公司品牌商

抚生

品牌介绍

抚生

品牌介绍

抚生

品牌介绍

实验室细胞培养过程步骤分述

上海抚生实业有限公司

推荐产品

实验室细胞培养过程步骤分述