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公司新闻/正文
ELISA 酶联免疫吸附测定洗板机洗板关键点
194 人阅读发布时间：2024-09-19 13:57
ELISA 即酶联免疫吸附测定，是一类常用的免疫酶技术。主要方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，然后利用酶标记（偶联）的抗体或抗原与之孵育，加入显色剂显色，通过酶标仪测定待测物颜色与标准物颜色的差异，绘制出酶活曲线得出待测物浓度。优化ELISA的重点之一在于洗涤。洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。
洗板机洗板人为因素少，速度快，条件恒定，但是使用洗板机洗板时应注意以下三个关键点。
1、洗涤参数
主要的参数是洗涤量。自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过高背景，那么不要犹豫，将洗涤量调为高，最好是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到，从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。
江莱生物ELISA试剂盒的使用手册中列出包被量。我们建议使用350µl洗涤液进行洗涤，以便清洁整个反应孔的壁。一般来说，洗涤量越高，则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。
2、洗涤次数
影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然，洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，一般而言，包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。
控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说，96孔板的每个孔能容纳330至460 µl。不过，有些自动化洗板机可设置程序，分配远远超出这个量的洗涤液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其实很简单，就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说，随着分液器分配更多的液体，抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量，但不会溢出到其他孔中。
3、抽 吸
还有一些参数会影响洗涤步骤的效果。这些参数包括吸液高度和吸入位置，这两者都能调整，以降低背景（残留量）和差异。
残留液体中包含未结合的抗原或抗体，它们会增加背景信号。残留量越小，残留液体越少，转移到下一步的干扰液体也就越少。
吸液高度会明显影响残留量；如果洗涤吸头与反应孔底部的距离稍大，那就会让残留量急剧增加。反之，如果洗涤吸头压着反应孔底部，那么也会使吸液效率降低，残留量增加。
目前的洗板机一般使用两种类型的洗头：刚性和浮动。浮动洗头中的吸头可在洗涤过程中自由上下移动，而刚性洗头则固定在适当的位置。使用刚性洗头的洗涤操作在优化起来更为复杂，因为你需要非常仔细地调整吸液高度。如果你们实验室使用几种不同的板，那可能会很耗时。在使用浮动洗头时，吸头会降到反应孔的底部。调整高度就不是很重要，因此洗头会下降到底部。
抽吸的位置也对残留量有着重要影响；如果每个孔只使用一个抽吸点（这很常见，因为更快），那么抽吸的位置需要优化。*佳的位置取决于洗头的性状，但它几乎不在反应孔的中间，即使这是所有洗头常见的默认位置。一般来说，最佳位置在孔中间与孔壁之间的某处。
反应孔的形状也会影响残留量。C形底（平底圆角）的微孔板一般会比那些平底尖角的微孔板残留量更低。
洗涤时注意事项：
1、板要平整，尤其是在用洗板机洗板的过程中，往往是3排一起洗，如果板不平，就很可能造成洗液有残留，从而导致非特异性结合不能清除干净，对实验结果造成干扰。
2、洗液温度，实验表明，洗液温度也会影响洗板的干净程度，尤其是冬天温度过低时容易出现“花板”问题。因此，保持室温在20℃-30℃。
3、洗液要注满孔，孔壁洗涤不干净也易造成“花板”现象。
4、洗液要新鲜配置，洗液要临用新鲜配制，放置时间过长易产生絮状物或混浊，造成赌孔或花板。
5、洗板次数不够或洗涤间隔时间过短也会造成由于洗板不净而造成“花板”。
洗板机洗板人为因素少，速度快，条件恒定，但是使用洗板机洗板时应注意以下三个关键点。
1、洗涤参数
主要的参数是洗涤量。自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过高背景，那么不要犹豫，将洗涤量调为高，最好是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到，从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。
江莱生物ELISA试剂盒的使用手册中列出包被量。我们建议使用350µl洗涤液进行洗涤，以便清洁整个反应孔的壁。一般来说，洗涤量越高，则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。
2、洗涤次数
影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然，洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，一般而言，包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。
控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说，96孔板的每个孔能容纳330至460 µl。不过，有些自动化洗板机可设置程序，分配远远超出这个量的洗涤液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其实很简单，就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说，随着分液器分配更多的液体，抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量，但不会溢出到其他孔中。
3、抽 吸
还有一些参数会影响洗涤步骤的效果。这些参数包括吸液高度和吸入位置，这两者都能调整，以降低背景（残留量）和差异。
残留液体中包含未结合的抗原或抗体，它们会增加背景信号。残留量越小，残留液体越少，转移到下一步的干扰液体也就越少。
吸液高度会明显影响残留量；如果洗涤吸头与反应孔底部的距离稍大，那就会让残留量急剧增加。反之，如果洗涤吸头压着反应孔底部，那么也会使吸液效率降低，残留量增加。
目前的洗板机一般使用两种类型的洗头：刚性和浮动。浮动洗头中的吸头可在洗涤过程中自由上下移动，而刚性洗头则固定在适当的位置。使用刚性洗头的洗涤操作在优化起来更为复杂，因为你需要非常仔细地调整吸液高度。如果你们实验室使用几种不同的板，那可能会很耗时。在使用浮动洗头时，吸头会降到反应孔的底部。调整高度就不是很重要，因此洗头会下降到底部。
抽吸的位置也对残留量有着重要影响；如果每个孔只使用一个抽吸点（这很常见，因为更快），那么抽吸的位置需要优化。*佳的位置取决于洗头的性状，但它几乎不在反应孔的中间，即使这是所有洗头常见的默认位置。一般来说，最佳位置在孔中间与孔壁之间的某处。
反应孔的形状也会影响残留量。C形底（平底圆角）的微孔板一般会比那些平底尖角的微孔板残留量更低。
洗涤时注意事项：
1、板要平整，尤其是在用洗板机洗板的过程中，往往是3排一起洗，如果板不平，就很可能造成洗液有残留，从而导致非特异性结合不能清除干净，对实验结果造成干扰。
2、洗液温度，实验表明，洗液温度也会影响洗板的干净程度，尤其是冬天温度过低时容易出现“花板”问题。因此，保持室温在20℃-30℃。
3、洗液要注满孔，孔壁洗涤不干净也易造成“花板”现象。
4、洗液要新鲜配置，洗液要临用新鲜配制，放置时间过长易产生絮状物或混浊，造成赌孔或花板。
5、洗板次数不够或洗涤间隔时间过短也会造成由于洗板不净而造成“花板”。