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上海抚生实业有限公司
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胎牛血清（FBS）特性与制备过程
人阅读 发布时间：2023-12-26 11:55
胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）是在生物医学研究和细胞培养中广泛使用的重要生物制品，它含有丰富的生长因子、蛋白质和其他生物分子，对细胞生长和增殖起着至关重要的作用。制备胎牛血清是一个复杂的过程，通常由专业的生物制品公司进行，以确保其质量和纯度。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。胎牛血清是母牛在怀孕五至八月龄胎时，将胎牛取出并进行心脏穿刺取血。穿刺取血可避免外界的污染。而新生牛血清是从刚出生到2周内的新生牛静脉采血。和新生牛血清相比，胎牛血清显然产量低，成本高。
胎牛血清是一种性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
一、胎牛血清性能：
1、性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。
2、蛋白质含量 3.5%～5.0%（ w/v）
3、血红蛋白含量 ≤ 0.02%（ w/v）
4、无菌检验 阴性
5、支原体检验 阴性
6、细菌内毒素 ≤5（EU/ml）
7、牛腹泻病毒 阴性
8、大肠杆菌噬菌体 阴性
9、支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14)生长曲线（接种浓度）最大增殖浓度≥2.5×106个/ml
细胞倍增时间 ≤15h
克隆率 ≥85%
二、血清的优劣好坏分辨
现在市场上的胎牛血清种类，很多人分辨血清的优劣好坏很困难。在这里总结了以下几点：
1、看颜色
根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。
国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。
进口胎牛血清或多或少总有点溶血，因为真正的胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂。
总的来说，国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量的呈现出谈黄、微红色，如Gibco 16000，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭活血清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖啡色。
2、看澄清度
进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡，而国产血清，因为绝大多数是新生牛血清，相对而言加粘稠，颜色略深，这对于初步接触血清的人很难判断，但把两者进行对比，可容易分辨。
3、看沉淀
很多血清客户，会发现进口血清有沉淀，从而怀疑血清的质量问题，这是没有根据的。
血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有任何影响，沉淀的产生原因很多，和厂家的加工生产方式密切相关。
国产的血清，从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融，每次冻融过程，就会析出部分纤维蛋白沉淀，这样，血清成品过滤后看起来反而加的“干净”，很少有沉淀产生。
进口的胎牛血清，过滤分装前很少会反复冻融，生产后的成品也是清澈的，但随着时间的推移，血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然，进口的新生牛血清，一般牛龄都在2周左右，血清中的各种蛋白含量明显偏高，生产后血清可能会浑浊，甚至有大量沉淀。
当然，购买回来的血清都是冰冻状态，使用时需要融化，融化过程在温度较低的状态下慢慢进行，否则沉淀相对较多，虽然沉淀并不直接影响血清的质量，但对细胞的显微观察有一定的阻碍。
三、胎牛血清制备过程的主要步骤：
1、采集胎牛血液
制备胎牛血清的第一步是采集胎牛的血液。这需要在专业场所进行，确保采集的胎牛来自健康且受监控的牧场。采集血液需要遵循伦理和动物福利的法规和标准。确保供体是5-8月龄的牛胚胎。
2、血液分离
采集的胎牛血液会经过离心分离，将血浆与血细胞分开。血浆中包含了胎牛血清的大部分有利于细胞体外生长和繁殖的营养成分，如蛋白质、生长因子和激素。
3、过滤和清理
分离后的血浆会经过过滤等步骤，以去除残留的细胞碎片和颗粒物。这有助于提高血清的质量和纯度，确保它不含有微生物或其他污染物。
4、灭菌
胎牛血清需要进行灭菌处理，以确保其中不含有微生物污染。常见的灭菌方法包括过滤、辐照（细胞治疗专用）等，这些方法可以有效地杀灭细菌、病毒和其他微生物。
以Ausbian进口特级胎牛血清为例：将经过初步检测合格的很多供体胎牛的粗血清，混合在一起，在低温条件下，经七次加压过滤，最后三次为0.1 µm无菌过滤处理，得到浅黄色，澄清，稍粘稠液体。同一批次血清质量上基本无差异。不同厂家一个批次产量差异较大，从100升到2000升不等。批次大，更利于试验的稳定和连续的可参照性。
5、质量控制
制备后的胎牛血清通常会经过一系列的质量控制测试，包括检测其对细胞培养的兼容性、生长因子和激素水平，以确保其质量符合要求。这些测试有助于验证血清的质量和生物活性。
6、分装和储存
制备后的胎牛血清会被分装到小瓶或小管中，并严格冷冻保存。这有助于防止血清中的成分降解或受到污染。储存温度通常为零下20摄氏度或更低，以确保血清的长期保存稳定性。
总之，制备胎牛血清是一个复杂的过程，需要专业的设备和技术。在实验室中，研究人员通常会从可靠的商业供应商购买胎牛血清，这些供应商生产的胎牛血清符合严格的质量标准，可以用于细胞培养和生物医学研究。正确使用和存储胎牛血清是确保实验成功的关键，因此研究人员应遵循供应商的建议和操作规程，以充分利用这一重要的生物制品。
胎牛血清是一种性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
一、胎牛血清性能：
1、性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。
2、蛋白质含量 3.5%～5.0%（ w/v）
3、血红蛋白含量 ≤ 0.02%（ w/v）
4、无菌检验 阴性
5、支原体检验 阴性
6、细菌内毒素 ≤5（EU/ml）
7、牛腹泻病毒 阴性
8、大肠杆菌噬菌体 阴性
9、支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14)生长曲线（接种浓度）最大增殖浓度≥2.5×106个/ml
细胞倍增时间 ≤15h
克隆率 ≥85%
二、血清的优劣好坏分辨
现在市场上的胎牛血清种类，很多人分辨血清的优劣好坏很困难。在这里总结了以下几点：
1、看颜色
根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。
国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。
进口胎牛血清或多或少总有点溶血，因为真正的胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂。
总的来说，国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量的呈现出谈黄、微红色，如Gibco 16000，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭活血清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖啡色。
2、看澄清度
进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡，而国产血清，因为绝大多数是新生牛血清，相对而言加粘稠，颜色略深，这对于初步接触血清的人很难判断，但把两者进行对比，可容易分辨。
3、看沉淀
很多血清客户，会发现进口血清有沉淀，从而怀疑血清的质量问题，这是没有根据的。
血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有任何影响，沉淀的产生原因很多，和厂家的加工生产方式密切相关。
国产的血清，从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融，每次冻融过程，就会析出部分纤维蛋白沉淀，这样，血清成品过滤后看起来反而加的“干净”，很少有沉淀产生。
进口的胎牛血清，过滤分装前很少会反复冻融，生产后的成品也是清澈的，但随着时间的推移，血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然，进口的新生牛血清，一般牛龄都在2周左右，血清中的各种蛋白含量明显偏高，生产后血清可能会浑浊，甚至有大量沉淀。
当然，购买回来的血清都是冰冻状态，使用时需要融化，融化过程在温度较低的状态下慢慢进行，否则沉淀相对较多，虽然沉淀并不直接影响血清的质量，但对细胞的显微观察有一定的阻碍。
三、胎牛血清制备过程的主要步骤：
1、采集胎牛血液
制备胎牛血清的第一步是采集胎牛的血液。这需要在专业场所进行，确保采集的胎牛来自健康且受监控的牧场。采集血液需要遵循伦理和动物福利的法规和标准。确保供体是5-8月龄的牛胚胎。
2、血液分离
采集的胎牛血液会经过离心分离，将血浆与血细胞分开。血浆中包含了胎牛血清的大部分有利于细胞体外生长和繁殖的营养成分，如蛋白质、生长因子和激素。
3、过滤和清理
分离后的血浆会经过过滤等步骤，以去除残留的细胞碎片和颗粒物。这有助于提高血清的质量和纯度，确保它不含有微生物或其他污染物。
4、灭菌
胎牛血清需要进行灭菌处理，以确保其中不含有微生物污染。常见的灭菌方法包括过滤、辐照（细胞治疗专用）等，这些方法可以有效地杀灭细菌、病毒和其他微生物。
以Ausbian进口特级胎牛血清为例：将经过初步检测合格的很多供体胎牛的粗血清，混合在一起，在低温条件下，经七次加压过滤，最后三次为0.1 µm无菌过滤处理，得到浅黄色，澄清，稍粘稠液体。同一批次血清质量上基本无差异。不同厂家一个批次产量差异较大，从100升到2000升不等。批次大，更利于试验的稳定和连续的可参照性。
5、质量控制
制备后的胎牛血清通常会经过一系列的质量控制测试，包括检测其对细胞培养的兼容性、生长因子和激素水平，以确保其质量符合要求。这些测试有助于验证血清的质量和生物活性。
6、分装和储存
制备后的胎牛血清会被分装到小瓶或小管中，并严格冷冻保存。这有助于防止血清中的成分降解或受到污染。储存温度通常为零下20摄氏度或更低，以确保血清的长期保存稳定性。
总之，制备胎牛血清是一个复杂的过程，需要专业的设备和技术。在实验室中，研究人员通常会从可靠的商业供应商购买胎牛血清，这些供应商生产的胎牛血清符合严格的质量标准，可以用于细胞培养和生物医学研究。正确使用和存储胎牛血清是确保实验成功的关键，因此研究人员应遵循供应商的建议和操作规程，以充分利用这一重要的生物制品。
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