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一文了解PCR仪工作原理及使用说明

人阅读 发布时间:2022-11-01 13:43

一、PCR仪定义:
通过PCR(聚合酶链式反应)技术,对特定DNA进行扩增的仪器。

普通PCR仪:只进行PCR扩增的PCR仪,实际上是一个温控设备。普通PCR仪只能实现DNA的扩增,分析检测需要在扩增之后。而扩增后到检测分析的这个过程,因为要将样品中仪器中取出来,所以容易受到污染,同时也容易污染环境。

实时荧光PCR仪:在普通PCR仪的基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。在作为温控设备的同时加入荧光分析系统。

在扩增的同时,通过前期准备工作的时候,PCR扩增体系中加入荧光集团,而后通过荧光信号采集系统实时采集,存储数据,将检测分析步骤集中到仪器上,减少人员后续的检测操作,降低了污染和被污染的风险。

二、PCR仪工作原理:

下面的步骤是PCR的反应原理,同时也是PCR仪的工作原理。
简单的说,就是通过高温变性,退火复性,延伸复制三个部分。
双链DNA在一定的环境中,通过在90-95℃变性,形成单链,然后退火降温到40-60℃,
在引物及其他辅助因子的作用下,使其初步结合,再快速升温至70-75℃,在相关酶的催化作用下,合成双链。完成一个扩增循环。
由此我们也可以得出PCR仪的一个主要参数:温度,温度示值是否准确,升温速率的快慢是影响其的一个主要因素。
具体要加什么缓冲液,要加什么引物,以及其他一些辅助因子,后续我们再去了解。

三、PCR仪的校准参数

我们上面提到了反应的原理,由此我们可以简单的推断:温度作为变性-复性-延伸的基本设置,这个是我们需要校准的一个项目。
那么在反应的过程中,温度示值与设定值是否准确,我们需要知道。这是第一个温度示值误差;因为我们需要升温,降温,升温,这是不是涉及到一个速率的问题,升降温的快慢,会直接影响到整个反应过程,所以,升降温速率也是我们需要考量的一个方向。仪器通过加热模块去控制温度,在快速升降温的过程中,仪器不可避免的会先升高/降低温度之后,再达到所设定的问题,这就是温度的过冲,这也是可能也是一个考量的指标。达到一定的温度之后,仪器要平衡一段时间(所设定的时间),而温度平衡的时间和设置的时间,是否一致,也是要考虑的一个方向。不同的DNA模板,需要的温度和解链的时间不一样,如果解链的时间没达到要求,DNA没有完全变性,在降温复性的过程中,会恢复到天然的状态。

PCR仪有48孔、96孔,384孔,每一个孔都可以放一个样品,自然我们上面所说的温度参数,还是有一些不全。这里大致总结一下:温度示值误差、温度均匀性、温度最大冲量、温度持续时间准确度、平均升降温速率,最大升降温速率等。

四、PCR仪用途:
简单的来说,就是所采集到的样品含量太低,无法正常的用仪器进行检测分析,所以需要通过PCR仪PCR技术来实现样品扩增。扩增的倍数2N次方。2-4-8-16-32-64-128-256······
通过这个技术,可以用于分子生物学研究:核酸定量分析,基因表达差异分析等等。医学研究:产前诊断,病原体检测如最近的新冠病毒等等方面

 

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