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有关抗体保存说明
1474 人阅读发布时间：2022-07-28 13:26
抗体的保存方法一般会直接影响抗体的活性和使用效果。在保存得当的情况下，大部分抗体可以存放数月甚至数年，一般情况需严格按照抗体说明书来进行保存。
一、保存温度:
对于许多抗体而言，分装为小份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是最佳的保存条件。分装抗体可以最大限度减少冻融对抗体造成的损坏，还可避免多次从同一管中移取抗体而引入污染。分装后抗体只可冻融一次，如有剩余，应保存在 4 ℃ 下。
当您收到定制的抗体后，请以 10,000 × g 离心 20 秒，沉降滞留在管盖螺纹中的溶液，然后分装抗体并将其转移至低蛋白质结合的微量离心管中。分装抗体的量取决于您在实验中常用的量。分装抗体时，每管应不少于 10 μL；分装抗体量越少，浓度就越容易受到蒸发以及储存样品管表面吸附的影响。在大部分情况下，可在收到抗体之后立即将其保存于 4 ℃ 下，可保存 1 至 2 周。遵循数据表上的保存建议非常重要。
二、特殊抗体保存条件:
1、切勿冻存酶偶联抗体，而应将其保存在 4 ℃ 下。冻融不仅会影响抗体的结合能力，还会降低酶活性。
2、偶联抗体（无论是偶联有荧光染料、酶还是生物素）应保存在深色样品瓶中或用锡箔纸包裹样品瓶。暴露于光下会影响偶联物的活性。荧光偶联物尤其容易发生光致漂白，因此在实验各阶段都应避光保存。
3、IgG3 同型抗体的独特之处在于其解冻后容易形成聚集体，因此应始终保存在 4 ℃ 下。
腹水液中可能含有蛋白酶，因此收到后应尽快冻存。
三、污染
为了防止微生物污染，可将叠氮化na 加入抗体制备物中，叠氮化na 的最终浓度为 0.02%(w/v)。一般运送至实验室的抗体中都含有这种保护剂，其浓度范围为 0.02%-0.05%。保存缓冲液部分的详细数据会对此项进行说明。
四、不使用叠氮化na 的情况
1、如果要用抗体对活细胞进行染色或处理，或者要用抗体进行体内研究，请务必使用不含叠氮化na 的制备物。这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用，它会阻断细胞色素电子传递系统。
2、叠氮化na 会干扰涉及胺基的所有偶联反应，因此必须在进行偶联反应之前将其去除。完成偶联反应之后，可使用叠氮化na 保存抗体。另一种可用的抗菌剂是 0.01% 硫柳汞na（硫柳汞），这种物质不含伯胺。
3、抗体溶液中的叠氮化na 可通过渗析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da（IgM 约为600,000 Da），叠氮化na 的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微渗析装置可使叠氮化物顺利扩散出去，而抗体得以保留。
4、渗析过程在烧杯中（置于磁力搅拌器上，温度保持 4 ℃）进行，每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS，搅拌渗析装置 6小时。更换 PBS 两次，每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能，所有材料都应灭菌，并且应在无菌条件下处理所得制备物。
五、冻融损坏
反复冻融可能使抗体变性，导致抗体形成聚集体，从而降低其结合能力。
对大部分抗体而言，在 -20 ℃ 下保存就已足够；在 -80 ℃ 下保存并无明显优势。应避免使用无霜冰箱，因为此类冰箱的冻融循环（用于减少霜的形成）正是保存此类抗体需要避免的。出于相同的原因，应将抗体样品瓶放在冰箱中温度波动最小的区域，例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱门架上。
有些研究人员向抗体中加入冷冻保护剂甘油（最终浓度为 50%）以防止冻融损坏；甘油可将冷凝点降至 -20 ℃ 以下。虽然这种方法可用于多种抗体，不建议在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液，因为该温度低于甘油的冷凝点。请注意，甘油可能会被细菌污染。如果加入了甘油或任何冷冻保护剂，应当小心操作，确保获得无菌制备物。
六、蛋白质浓度和稳定性
将抗体稀释至工作浓度后，在 4 ℃ 下保存不得超过一天。一般而言，以高浓度保存的蛋白质更不易降解，理想浓度是 1 mg/mL 或更高。这就是将蛋白质（如 BSA）作为稳定剂加入抗体溶液的基本原理。加入的蛋白质还能尽可能减少抗体结合到容器壁上造成的损失。请勿向将要进行偶联的抗体中加入蛋白质稳定剂，因为蛋白质稳定剂会与抗体竞争，降低偶联效率。
七、抗体保存注意事项：
1、加入甘油：对于大多数抗体，可加入50%的甘油来避免反复冻融。甘油在-20℃可降低冰点，但不建议加入甘油的抗体保存于-80℃，该温度已经超过了甘油的冰点；
2、加蛋白保护剂：蛋白在高浓度时不易降解，正如有些抗体会加入BSA作为稳定剂的原因，同时加入蛋白也可减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
3、加入叠氮化na ：为了防止微生物污染，经常选择加入叠氮化na 到抗体中（终浓度 0.02% (w/v)）。但在下述情况中不能使用叠氮化na 抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究。叠氮化na 在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的 细胞色素电子传递系统cytochrome electron transportsystem。要偶联带有氨基的抗体。叠氮化na 会干扰任何含有氨基的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化na 去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化na 保存，但是浓度只能是0.01％。对于需要偶联的抗体，硫柳汞 (merthiolate)可以替代叠氮化na 作为保护剂。
此外，如果需要去除叠氮化na ，可以通过凝胶电泳或过滤的方式（IgG 的分子量是 150kDa，叠氮化na 的分子量只有65Da），使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化na 从抗体中去除。
一、保存温度:
对于许多抗体而言，分装为小份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是最佳的保存条件。分装抗体可以最大限度减少冻融对抗体造成的损坏，还可避免多次从同一管中移取抗体而引入污染。分装后抗体只可冻融一次，如有剩余，应保存在 4 ℃ 下。
当您收到定制的抗体后，请以 10,000 × g 离心 20 秒，沉降滞留在管盖螺纹中的溶液，然后分装抗体并将其转移至低蛋白质结合的微量离心管中。分装抗体的量取决于您在实验中常用的量。分装抗体时，每管应不少于 10 μL；分装抗体量越少，浓度就越容易受到蒸发以及储存样品管表面吸附的影响。在大部分情况下，可在收到抗体之后立即将其保存于 4 ℃ 下，可保存 1 至 2 周。遵循数据表上的保存建议非常重要。
二、特殊抗体保存条件:
1、切勿冻存酶偶联抗体，而应将其保存在 4 ℃ 下。冻融不仅会影响抗体的结合能力，还会降低酶活性。
2、偶联抗体（无论是偶联有荧光染料、酶还是生物素）应保存在深色样品瓶中或用锡箔纸包裹样品瓶。暴露于光下会影响偶联物的活性。荧光偶联物尤其容易发生光致漂白，因此在实验各阶段都应避光保存。
3、IgG3 同型抗体的独特之处在于其解冻后容易形成聚集体，因此应始终保存在 4 ℃ 下。
腹水液中可能含有蛋白酶，因此收到后应尽快冻存。
三、污染
为了防止微生物污染，可将叠氮化na 加入抗体制备物中，叠氮化na 的最终浓度为 0.02%(w/v)。一般运送至实验室的抗体中都含有这种保护剂，其浓度范围为 0.02%-0.05%。保存缓冲液部分的详细数据会对此项进行说明。
四、不使用叠氮化na 的情况
1、如果要用抗体对活细胞进行染色或处理，或者要用抗体进行体内研究，请务必使用不含叠氮化na 的制备物。这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用，它会阻断细胞色素电子传递系统。
2、叠氮化na 会干扰涉及胺基的所有偶联反应，因此必须在进行偶联反应之前将其去除。完成偶联反应之后，可使用叠氮化na 保存抗体。另一种可用的抗菌剂是 0.01% 硫柳汞na（硫柳汞），这种物质不含伯胺。
3、抗体溶液中的叠氮化na 可通过渗析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da（IgM 约为600,000 Da），叠氮化na 的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微渗析装置可使叠氮化物顺利扩散出去，而抗体得以保留。
4、渗析过程在烧杯中（置于磁力搅拌器上，温度保持 4 ℃）进行，每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS，搅拌渗析装置 6小时。更换 PBS 两次，每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能，所有材料都应灭菌，并且应在无菌条件下处理所得制备物。
五、冻融损坏
反复冻融可能使抗体变性，导致抗体形成聚集体，从而降低其结合能力。
对大部分抗体而言，在 -20 ℃ 下保存就已足够；在 -80 ℃ 下保存并无明显优势。应避免使用无霜冰箱，因为此类冰箱的冻融循环（用于减少霜的形成）正是保存此类抗体需要避免的。出于相同的原因，应将抗体样品瓶放在冰箱中温度波动最小的区域，例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱门架上。
有些研究人员向抗体中加入冷冻保护剂甘油（最终浓度为 50%）以防止冻融损坏；甘油可将冷凝点降至 -20 ℃ 以下。虽然这种方法可用于多种抗体，不建议在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液，因为该温度低于甘油的冷凝点。请注意，甘油可能会被细菌污染。如果加入了甘油或任何冷冻保护剂，应当小心操作，确保获得无菌制备物。
六、蛋白质浓度和稳定性
将抗体稀释至工作浓度后，在 4 ℃ 下保存不得超过一天。一般而言，以高浓度保存的蛋白质更不易降解，理想浓度是 1 mg/mL 或更高。这就是将蛋白质（如 BSA）作为稳定剂加入抗体溶液的基本原理。加入的蛋白质还能尽可能减少抗体结合到容器壁上造成的损失。请勿向将要进行偶联的抗体中加入蛋白质稳定剂，因为蛋白质稳定剂会与抗体竞争，降低偶联效率。
七、抗体保存注意事项：
1、加入甘油：对于大多数抗体，可加入50%的甘油来避免反复冻融。甘油在-20℃可降低冰点，但不建议加入甘油的抗体保存于-80℃，该温度已经超过了甘油的冰点；
2、加蛋白保护剂：蛋白在高浓度时不易降解，正如有些抗体会加入BSA作为稳定剂的原因，同时加入蛋白也可减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
3、加入叠氮化na ：为了防止微生物污染，经常选择加入叠氮化na 到抗体中（终浓度 0.02% (w/v)）。但在下述情况中不能使用叠氮化na 抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究。叠氮化na 在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的 细胞色素电子传递系统cytochrome electron transportsystem。要偶联带有氨基的抗体。叠氮化na 会干扰任何含有氨基的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化na 去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化na 保存，但是浓度只能是0.01％。对于需要偶联的抗体，硫柳汞 (merthiolate)可以替代叠氮化na 作为保护剂。
此外，如果需要去除叠氮化na ，可以通过凝胶电泳或过滤的方式（IgG 的分子量是 150kDa，叠氮化na 的分子量只有65Da），使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化na 从抗体中去除。