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ELISA检测试剂盒实验技巧与注意要点

人阅读 发布时间:2021-11-15 16:41

ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。ELISA检测试剂盒试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒实验技巧:

1.操作前应对实验的物理参数有充分的了解,如环境温度(保持在18C~25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等,要先查看水育箱温度,ELISA试剂盒是否符合要求。

2.正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂,避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅,血清残留在反应孔壁上,加样器吸头要清洗干净,避免污染,加样次序要与说明书一致,否则可导致结果错误,实验重复性差。

3.手工洗板加洗液时冲击力不要太大,洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数,洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流,造成孔问污染,导致假阴性或假阳性。

4.要保证加液量一致ELISA试剂盒我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好,滴瓶不易控制加液量不准,造成显色不统一,判断错误。

5.显色液量不可过多加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下,加显色系统后要避光反应,显色液量不能过多,以免显色过强。

ELISA试剂盒的影响因素应选用有国家批准文号,质量靠得住的产品,不能图便宜,忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内,在使用时先平衡至室温,不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完,剩余的试剂下次用时应先检查是否变质,显色剂如被污染变色将造成全部显色,导致错误结果。在实验过程中常犯了以下几个小错误的话也会出现实验误差的。

1.做实验时少说话,防止唾液掉进酶标条中。
2.加入一抗二抗需要放入37°。
3.如果同时做多个板子,多个板子别罗一起;尽量少用排枪。
4.加样时,由低浓度向高浓度加,这样减少跳孔的几率。
5.勤换枪头。
一、移液器的使用,加样(抗体)等需要准确定量的试剂时不使用排枪,经验证明排枪很不准确,极易跳孔,不要图便宜买低档的tips 因为ELISA不但会放大被检测的目的蛋白,也会放大非特异结合的杂质蛋白。
               

二、倍比稀释样品时,稀释倍数最好要小于10。
三、所有的装跟ELISA检测试剂盒相关试剂的容器,玻璃制品的要干烤过或者使用一次性的树脂容器。

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