我司分享：细胞污染类型的区别

细胞污染类型的区别

(1)  肉眼观察 ---- 细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到，例如培养液变混浊，或略加振荡有很多漂浮物漂起。  

(2)  接种观察 ---- 用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可发现是否有污染。   

(3)  镜下观察 ---- 倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮，即为细菌污染。细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。    

2、支原体污染的检测

(1)  相差显微镜观察 ---- 接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。  

(2)  荧光染色法观察 ---- 荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。  

(3)  电镜检测 ---- 条件许可，可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48～72小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。  

(4)  培养检测 ---- 细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基，培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀，然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。