关于Elisa试剂盒的几个操作难点解答

                                                                 关于Elisa试剂盒的几个操作难点解答
人生若是一场旅途，无所谓的是起点和终点，真正让人在乎的是路上的人和风景。看花开花谢，品聚散离别，我们的行囊从此不再空空如也。接下来介绍关于Elisa试剂盒的几个操作难点解答.

一、加入底物显色后，所有的孔颜色都较淡，最后OD读数都很小，没有明显的差别？ 

提示：因为颜色都差不多，导致各个组分之间差异很小，结果不可用。
主要考虑以下几点并加以改进：
1、实验过程中孵育时间及孵育温度可能未达到要求，孵育温度应控制在37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作，保温期内不宜多开门，以免影响保温；
2、洗板次数过多，浓缩洗液稀释倍数不符合要求，洗涤冲击力太大，浸泡时间太长等都会导致显色较浅。
3、所有试剂、样品在使用前未平衡至室温，这会降低试剂中有效浓度的发挥，从冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡20min左右，HRP的显色底物也有多种，具体实验中要了解各种底物的使用方法以及最大吸收波长等

二、加入底物显色后，大部分孔颜色都较深，最后OD读数都很大，没有明显的差别?

颜色很深也会导致各个组分之间差异很小，结果不可用。

考虑以下几点并加以改进：
1、考虑封闭问题，仔细阅读说明书，以确定是否需要封闭和封闭的具体方法。
2、适宜的抗体浓度对最后结果显示差异很重要，根据说明书的推荐比例或进行预实验摸索，以确定最佳稀释比例。然后严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，按要求置留洗涤液时间和洗涤次数。
3、底物加入后显色时间不宜过长，终止液终止后立即进行OD值的检测。
三、实验结束后，阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本显色很弱？ 

说明实验系统本身正常，需要考虑一下

待测标本中可能不含强阳性标本。
标本中加入了叠氮钠作为防腐剂，酶联免疫实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂。

四、用于ELISA检测的血液标本在制备实验样品时、以及加样时需要注意的地方如下：
 
标本为血清时最好将血液先自然存放1-2h后，再以3000rpm 离心15min；
标本为血浆时，采血时必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后以3000rpm离心15min；
以上标本可置于2-8℃冰箱中短期保存数日，若要贮存，则置于-20°C的低温冰箱内。加样完毕后应及时放入孵箱，标本较多时，请分批操作。