腺病毒E型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书

1、 试剂盒简介货为了适应腺病毒E型探针法快速检测和疫病研究的需要，本公司参照 OIE 国际标准中规定的引物序列，经多次实验及系统优化，开发生产了本试剂盒。应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、安全操作简单、应用广泛和高通量检测等特点及优点。2、试剂盒组成:
试剂盒组成包括核酸提取试剂和核酸扩增试剂，具体组成参见表 1：
表 1：试剂盒组成（50test/盒）

组成成分	体积
样品 DNA 提取液 1 样品 DNA 提取液 2	5ml×1 管 500µl×1 管
核酸扩增试剂： DEPC 水 BP PCR 反应液 Taq 酶(5U/ul) 阴性对照 BP 阳性对照	5ml×1 管 750µl×1 管 40µl×1 管 1ml×1 管 1ml×1 管

*保存条件：样品 DNA 提取液 1、2 和试剂盒须在-20℃保存。

3、样本采集，存放及运输
 

1. 1. 样本采集

所用取样器材必须经过高压灭菌并烘干。取对虾的腮丝、肝胰腺、腹肢等组织各30mg标记后置于离心管中，按照试剂盒配套的DNA抽提试剂盒操作说明提取DNA模板。

1. 1. 存放

研磨后的样本应尽快提取 DNA；待测样本应避免冻融。
 

1. 1. 运输

采用或泡沫箱加冰密封进行运输。
 

4、检测步骤

 

1. 1. 1. DNA 核酸提取操作方法(在样本处理区进行)：
         取 n 个 1.5ml 灭菌 Eppendorf 管，其中 n 为待检样品数和一管阴性对照之和，对每个管进行编号标记。(注：试剂盒中的阳性对照直接作为 PCR 检测的模板，无需提取核酸)
      2. 每管加入 100 µl DNA 提取液 1，然后分别加入待测样本和阴性对照各 100µl，一份样本换用一个吸头；混匀器上震荡混匀 5 s,于 4℃～25℃条件下，12 000 r/min 离心 10 min。
      3. 尽可能吸弃上清且不碰沉淀，再加入 10µl DNA 提取液 2，混匀器上震荡混匀 5s,于 4℃～25℃ 条件下，2 000 r/min 离心 10 s。
      4. 100℃ 干浴或沸水浴 10 min；加入 90µl DEPC 水，12 000 r/min 离心 10 min，吸取上清， 即为提取的 DNA，冰上保存待用（提取的 DNA 需在 2 h 内进行 PCR 扩增或放置于-70℃冰箱内保存）。
   2. PCR 检测