上海抚生实业有限公司
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技术资料/正文
荜茇PCR鉴定试剂盒实验注意事项
13 人阅读发布时间:2020-01-03 15:32
荜茇PCR鉴定试剂盒注意事项:
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
荜茇PCR鉴定试剂盒反应体系相关内容:扩增缓冲液、dNTP混合物、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶以及Mg2+。
1.引物有多种设计方法,由PCR在实验中的目的决定,但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源:Pfu和Taq,分别来自两种不同的噬热菌。
2.模板即扩增用的DNA,可以是任何来源,但有两个原则:第一纯度必须较高,第二浓度不能太高以免抑制。
3.缓冲液的成分最为复杂,除水外一般包括四个有效成分:缓冲体系,一般使用HEPES或MOPS缓冲体系;一价阳离子,一般采用钾离子,但在特殊情况下也可使用铵根离子;二价阳离子,即镁离子,根据反应体系确定,除特殊情况外不需调整;辅助成分,常见的有DMSO、甘油等,主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。